基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)/陰道分泌物微生物檢查
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（一）原蟲(chóng)
引起陰道感染的原蟲(chóng)主要有是陰道毛滴蟲(chóng)，可致滴蟲(chóng)性陰道炎。病人外陰灼熱痛、瘙癢，陰道分泌物呈稀膿性或泡沫狀，將此分泌物采用生理鹽水懸滴法置于低倍顯微鏡下觀察，可見(jiàn)波動(dòng)狀或螺旋狀運(yùn)動(dòng)的蟲(chóng)體將周圍白細(xì)胞或上皮細(xì)胞推動(dòng)。在高倍鏡下可見(jiàn)蟲(chóng)體為8-45μm，呈項(xiàng)寬尾尖倒置梨形，大小多為白細(xì)胞的2-3倍，蟲(chóng)體項(xiàng)端有前鞭毛4根，后端有后鞭毛一根，體側(cè)有漢動(dòng)膜，借以移動(dòng)。此時(shí)陰道分泌物的清潔度為Ⅲ、Ⅳ度。
陰道貌岸然毛滴蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖的適宜溫度為25-42攝氏度，故在檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意保溫，方可觀察到陰道毛滴蟲(chóng)的活動(dòng)。陰道分泌物中查到陰道分泌物滴蟲(chóng)是診斷滴蟲(chóng)性陰道炎的依據(jù)，近年來(lái)采用陰道毛滴蟲(chóng)單抗制的膠乳免疫凝聚法劑盒可提高滴蟲(chóng)性陰道炎的診斷率。
在陰道分泌物中見(jiàn)到溶組織阿米巴滋養(yǎng)體時(shí)，提示為阿米巴性陰道炎。
（二）真菌
陰道真菌有時(shí)在陰道中存奪而無(wú)害，在陰道抵抗力減低時(shí)容易發(fā)病，真菌性陰道炎發(fā)找到真菌為診斷依據(jù)，陰道真菌多為白色假絲酵母菌，偶見(jiàn)陰道纖毛菌、放線菌等。采用懸滴法于低倍鏡下可見(jiàn)到白色絲假酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲。如取陰道分泌物涂片并時(shí)行革蘭氏染色后油觀察，可見(jiàn)到卵圓形革蘭氏陽(yáng)性孢子或與出芽細(xì)胞相連接的假菌絲，成鏈狀及分支狀。
（三）淋病奈瑟菌
淋病是目前世界上發(fā)病率較高的性傳播疾病之一。國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)約占門診性病患者的40%。人類是淋病奈瑟菌唯一的宿主。在性關(guān)系紊亂情況下造成在人群中的廣泛傳染及流行。臨床上多婁箐南現(xiàn)急性癥狀，少數(shù)為慢性過(guò)程。淋病奈瑟菌的檢查首先采用涂片法，發(fā)宮頸管內(nèi)分泌物涂片的陽(yáng)性率最高，為100%；陰道上1/3部分為84%；陰道口處為35%。一般需將宮頸表面膿液試去，用棉拭子插入宮頸管1厘米深處停留10-30s，旋轉(zhuǎn)一周取出，將分泌生淫在玻片上，革蘭氏染色后油鏡檢查，找革蘭氏陰道性雙球菌，形似腎或咖啡豆?fàn)?，凹面相?duì)，除散在于白細(xì)胞之間外，還可見(jiàn)其被吞噬于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)之內(nèi)，因淋病奈瑟菌對(duì)各種理化因子抵抗力弱，涂片法可被漏診，必要時(shí)可進(jìn)行淋病奈瑟菌培養(yǎng)，且有利于菌株分型和藥過(guò)敏試驗(yàn)。近年來(lái)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)的淋病抗血清，可與受檢查者宮頸分泌物中的淋病奈瑟菌結(jié)合，采用免疫熒光技術(shù)，在30分鐘內(nèi)即可準(zhǔn)確得出結(jié)果。比培養(yǎng)法快，比涂片支準(zhǔn)確，較易掌握。此外運(yùn)用PCR技術(shù)也可對(duì)淋病奈瑟菌過(guò)少，雜菌過(guò)多的標(biāo)本進(jìn)行診斷。
對(duì)于淋病非顯性感染者，其淋病奈瑟菌的鏡檢出和培養(yǎng)檢查常為陰性，但卻是淋病的重要傳染源。為此，近年來(lái)制備了多種檢測(cè)淋病奈瑟菌的基因探針。大部分淋病奈瑟菌內(nèi)含有多拷貝的4。2kb隱蔽性質(zhì)粒，此外淋病奈瑟菌青毒素抗性主要是由編碼β-骨酰胺酶的質(zhì)粒決定的，用這兩種質(zhì)粒標(biāo)記的探針與陰道分泌物進(jìn)行斑點(diǎn)雜交可分別探測(cè)淋病奈瑟菌及其抗藥性。其特異性敏感性均很高。目前還制備出淋病奈瑟菌DNA探針、菌毛探針和RNA探針，也建立了各種特異性高，敏感性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速的右面放射性標(biāo)記的檢測(cè)系統(tǒng)，成為淋病奈瑟菌及其抗藥性檢查的重要方法。
（四）陰道加德鈉菌
陰道加德鈉菌（Gardherellavaginalis;GV）和某些厭氧菌共同引起的細(xì)菌性陰道病亦屬于性傳播疾病之一。該菌還能以非性行為方式傳播。除引起陰道病外，尚可引起早產(chǎn)、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥、絨毛膜羊膜炎、不后敗血癥和膿毒血癥等。陰道加德鈉菌產(chǎn)生高濃度的丙酮酸的氨基酸，可被陰道厭氧菌群脫羧基生成相應(yīng)的胺，引起皮膚粘膜過(guò)敏。血管通透性增加，上皮細(xì)胞脫落，陰道分泌物呈奶油狀大量排出，有惡臭。患者陰道分泌物革蘭氏染色后可見(jiàn)陰道性或染色不定有時(shí)可染成革蘭氏陽(yáng)性的小桿菌。大小為（1.5-2.5）μm×0.5μm,具有多形性，呈桿狀或球桿狀，陰道分泌物PH常大小4.5，胺試驗(yàn)陽(yáng)性。
除對(duì)陰道加德鈉菌形態(tài)學(xué)鑒別外，還可進(jìn)行陰道菌群檢查，由于細(xì)菌性陰道貌岸然病時(shí)乳酸桿菌減少，加德鈉氏菌的厭氧菌增加，可計(jì)算乳酸桿菌和加德鈉菌的數(shù)量變化，作為本病診斷參考。一般取陰道分泌物涂片，革蘭氏染色，用油鏡觀察3-5個(gè)視野，計(jì)算各種菌的數(shù)量。乳酸性桿菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，（1-5）μm×1μm，常成雙，單根、鏈狀或柵狀排列，非細(xì)菌性陰道病乳酸桿菌>5個(gè)/油視野僅見(jiàn)少許加德鈉菌。細(xì)菌性陰道病不僅可見(jiàn)到加德鈉菌，還有其它革蘭氏陰性或陽(yáng)性桿菌，無(wú)乳酸桿菌或小于5個(gè)/油鏡視野。
尋找陰道分泌物中的線索細(xì)胞，是診斷加德鈉菌性陰道貌岸然病的重要指標(biāo)。線索細(xì)胞為陰道鱗狀上皮細(xì)胞粘附多數(shù)加德鈉菌所致生理鹽水涂片可見(jiàn)該細(xì)胞邊緣呈現(xiàn)鋸齒狀。細(xì)胞已有溶解，核模糊不清，其上附著大量加德鈉菌及厭氧菌，使其表面毛糙，有斑點(diǎn)和大量的細(xì)小顆粒，亦右用吖啶橙染色法或相差顯微鏡觀察法檢查線索細(xì)胞。此外還可用培養(yǎng)、熒光板、氣-液色譜分析和PCR方法等助診。
（五）衣原體
泌尿生殖道沙眼衣原體感染是目前很常見(jiàn)的性傳播疾病之一，國(guó)外報(bào)道生殖道感染率為10。8%，由于感染后無(wú)特異癥狀，易造成該病流行，引起子性急性陰道炎和宮頸炎。及原體感染的白帶膿性粘液，與細(xì)菌感染的膿性白帶不同。取膿性分泌物涂片，吉姆薩染色，有進(jìn)時(shí)可見(jiàn)到細(xì)胞內(nèi)包涵體，但陽(yáng)性率很低。過(guò)去采用傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)分離衣原體的方法，技術(shù)難度大，特異性敏感性均不理想，且費(fèi)時(shí)費(fèi)錢。目前應(yīng)用較多的是熒光標(biāo)記的單克隆抗體的直接熒光抗體法，可快速確定系何種血清型衣原體敏感。80年代發(fā)民展的DNA探針技術(shù)，可將陰道分泌物經(jīng)PBS稀解，離心后沉淀物經(jīng)蛋白求恩酶K水解，酚/氯仿抽提等處理后與沙眼衣原體探針，如外膜蛋白基因的高度保守序列，或TE-55DNA探針等進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，可檢出沙眼衣原體的15個(gè)血清型，而與其它細(xì)菌，病毒、立克次體等無(wú)交叉反應(yīng)，敏感性和特異性均為95%左右。DNA探針?lè)椒▽?duì)泌尿生殖道衣原體疾病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和無(wú)癥狀衣原體攜帶者的診斷很有意義。
（六）病毒
在人類性傳播疾病中有相當(dāng)一部分是由病毒引起的?？蓮年幍婪置谖镏袡z測(cè)的病毒有：
1．單純皰疹病毒（herpes simplex virus,HSV）有二個(gè)血清型，HSV-I和HSV-Ⅱ型。引起的生殖道感染的以Ⅱ型為主，約占85%。表南為生殖器官皰疹，潰瘍并通過(guò)胎盤引起胎兒感染，發(fā)生死胎、流主和畸形。實(shí)驗(yàn)診斷多取病損處分泌物涂片進(jìn)生細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、病毒培養(yǎng)或熒光抗體檢測(cè)。在孕期感染的監(jiān)測(cè)中，可采取宮頸部位分泌物做包涵體檢查。單純皰疹病毒以侵犯軍團(tuán)頸鱗狀上皮多見(jiàn)。感染早期細(xì)胞輕度或中度增大，核呈嗜堿性不透明的勻質(zhì)狀毛玻璃樣外觀，偶伴有核空泡化。由于核的增殖與胞質(zhì)腫大而形成多核或巨大細(xì)胞。感染晚期可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)有嗜伊紅包涵體，周圍有透明暈，由于陰道分泌物檢查陽(yáng)性率低，病毒培養(yǎng)操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)，近年來(lái)對(duì)HSV的檢查主要采用熒光抗體檢查或分子生物方法診斷，特別是利用HSV基因組中特異性強(qiáng)的DNA片段棗HSV-I和HSV-Ⅱ，胸腺激酶的寡核苷酸探針和RNA探針進(jìn)行分子雜交，可快速而靈敏地對(duì)HSV感染作出診斷。
2．人巨細(xì)胞病毒（human cytmegalovirus,HCMV）是先天感染的主要病原。一次感染后終年潛伏于體內(nèi)，在機(jī)體免疫力低下時(shí)病毒激活，可表現(xiàn)為巨細(xì)胞包涵體病。孕期胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到侵犯可致小頭畸形、智力低下、視聽(tīng)障礙等后遺癥。故孕婦陰道分泌物巨細(xì)胞病毒檢查對(duì)孕期監(jiān)測(cè)尤其是重要的，常用宮頸拭子采取分泌物送檢。HCMV實(shí)驗(yàn)室診斷方法除傳播病毒離法外，光鏡檢測(cè)包涵體陽(yáng)性就緒極低，電鏡可直直接見(jiàn)到典型的皰疹病毒類形態(tài)結(jié)構(gòu)，但無(wú)特異性，目前可采用CC-ABC法，即將標(biāo)本接種于人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞，使病毒在敏感細(xì)胞中增殖，培養(yǎng)2天后收獲，再用針對(duì)HCMV早期抗原的單克隆抗體，利用生物素親和素放大作用染色鑒定。亦可用HCMV、DNA片段或RNA探針與樣品進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，夾心雜交或 PCR后勤部的分子雜交來(lái)檢測(cè)，臨床最常用的方法是用ELISA法檢測(cè)孕婦血清 HCMV-IGM來(lái)診斷活動(dòng)性感染。
3．人乳頭狀病毒（human papillomavirus,HPV）HPV目前鑒別有50余型。引起婦性生殖道感染的有23型，其中最主要的有6，11，16，18，31，33，型。HPV感染細(xì)胞后細(xì)胞的作用的主要表現(xiàn)為：①增殖感染，即病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，產(chǎn)生感染子代致使細(xì)胞死亡。②細(xì)胞轉(zhuǎn)化，引起腫瘤發(fā)生，主要是引起生殖道鱗狀上皮肉瘤樣變，如16，18，31，33，35，29，型，尤其是宮頸癌患者以檢查出16，18型為多見(jiàn)。HPV檢測(cè)亦可采用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)、分泌物涂片、光鏡檢測(cè)。HE染色可見(jiàn)核周空暈?！皻馇驑印?a href="/w/%E7%97%85%E6%AF%92%E6%84%9F%E6%9F%93" title="病毒感染">病毒感染空泡細(xì)胞，但陽(yáng)性率很低。下生殖道疣狀贅生物者?？蛇M(jìn)行病理學(xué)鏡可電鏡檢查，可崢到典型的病毒感染細(xì)胞或閏毒顆粒。目前常采用ABC法以兔抗HPV為一抗，生物素標(biāo)記的羊抗兔IGG為二抗檢測(cè)病毒抗原。或采用病毒相應(yīng)的寡核苷酸探針，與陰道分泌物中提取的DNA進(jìn)行斑點(diǎn)雜交或夾心雜交進(jìn)行檢測(cè)。如采用PCR技術(shù)則可檢測(cè)極微量的HPV（即106個(gè)細(xì)胞中有一個(gè)感染細(xì)胞）
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